VA-044

組織透明化技術CLARITY相關試劑

　　一個世紀以來，生物學家們一直夢想著能夠透過器官甚至整個機體，親眼看到細胞連接和精細結構，現(xiàn)在隨著組織透明化技術的完善，這一夢想終于成為了現(xiàn)實。

◆原理

VA-044 作為組織透明化技術中起關鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑，普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在 CLARITY 方法中，VA-044 作為引發(fā)劑，催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和 PFA 形成水凝膠。

2013 年3 月，斯坦福大學的 Karl Deisseroth 博士領導的團隊在自然雜志（Nature）上發(fā)表了 Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文，文中介紹了制備組織的方法 CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中（Hydrogel Monomer Solution）中，經電泳使組織呈現(xiàn)透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結構，使生物分子結合到水凝膠的網孔上。重要的是脂類不會結合到水凝膠上，因而可以通過這種方式將脂類有效去除。通過這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實驗，免疫染色，原位雜交等實驗。

　　CLARITY 可用于熒光蛋白質和抗體的免疫染色，可作為解析腦神經回路的有效工具。VA-044 是論文實驗步驟中透明化工程的使用試劑。

◆特點• 優(yōu)勢

●   操作簡單，固定蛋白后只需進行電泳；

●    可保持組織、器官和全身結構的完整性；

●    可進行原位雜交和免疫組化實驗，可進行多輪染色和脫色步驟；

◆案例•應用

Clarity 介紹

PARS 介紹

2014 年7 月，加州理工學院的研究團隊在細胞雜志（Cell）上發(fā)表論文 Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，將 CLARITY 技術推進到一個新的高度——全身組織透明化技術，稱為 PARS（Perfusion-assisted Agent Release in Situ）。這種技術將透明劑持續(xù)泵入動物的循環(huán)系統(tǒng)從而進入各個組織，或者通過腦脊液管道泵入大腦，再去除脂質，使器官和生物體被高分子滲透而呈現(xiàn)透明，并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細胞結構和三維細胞排列。

CLARITY 處理的小鼠腦

CLARITY 處理的小鼠大腦成像

CLARITY 處理的 Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀察
（A）從大腦皮質到海馬的３-D觀察圖像
    （B）大腦皮層Ⅴ層的錐體細胞的樹突圖像
拍攝條件：雙光子   使用設備：Olympus FV1000 直立顯微鏡，25 倍浸液物鏡

CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像

CLARITY 處理后，用 Iba1抗體染色 Thy1-YFP（Ｈ線）小鼠大腦的熒光觀察
　　　　?。ˋ）在大腦皮質的小膠質細胞的３-D觀察圖像
（B）從表面層觀察皮質Ⅰ層的圖像
拍攝條件：單光子   使用設備：Olympus FV1000 直立顯微鏡，25 倍浸液物鏡

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組織透明化輔助試劑

脂質除去用電泳槽